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人雌二醇(E2)定量检测试剂盒

仅供科研使用,不得用于临床检验。

 

人雌二醇(E2定量检测试剂盒(ELISA)说明书

 

【产品名称】

通用名称:人雌二醇(E2)定量检测试剂盒(ELISA

英文名称: Human EstradiolE2ELISA KIT

 

【包装规格】

96人份/

 

【预期用途】

仅供科研使用,定量检测血清、血浆、等相关液体中雌二醇(E2)的浓度。

 

 

【检验原理】

采用酶联免疫竞争法检测样本中雌二醇含量。首先用羊抗兔包被微孔板,制成固相二抗,然后加入待测样本、辣根过氧化物酶标记雌二醇以及抗雌二醇抗体,使之形成包被二抗-抗雌二醇抗体-雌二醇(HRP)复合物,标记雌二醇的结合量与血清中的雌二醇量成反比。经显色后在酶标仪测定吸光值(OD值),通过计算机或作图拟合浓度-吸光度曲线,反算出待测血清中雌二醇含量。

 

 

 

 

 

 

 

 

【主要组成成分】

主要成分

组分

数量

主要成分

校准品

0.5ml/*6

抗体配制的6个浓度标准品

包被微孔板

96T

预包被固相抗原

HRP标记抗原

6mL

HRP标记的检测抗原

底物液A

6mL

过氧化脲工作液

抗体

6mL

抗雌二醇抗体

底物液B

6mL

TMB工作液

20×浓缩洗涤液

30mL

0.15%Tween20PBS

说明书

1

--

自封袋

1

--

不干胶

2

--

校准品浓度依次为:1400、700、350、120、40、0 pg/mL。校准品已经通过测试,结果表明HBs抗原阴性,HIV1HIV2HCV抗体阴性,由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质,本品必须按照具有潜在的感染性进行处理,处理过程应当遵循通用的安全措施。

 

需要但未提供的材料及耗材

  1、酶标仪

2、精密移液器及一次性吸头

3、蒸馏水

4、洗瓶或者自动洗板机

5、37℃水浴锅或恒温箱

6、500ml量筒

7、无粉一次性乳胶手套

 

 

 

 

 

【储存条件及有效期】

  1、2-8℃保存,切勿冷冻,有效期6个月。

  2、开封使用后,包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中,密闭自封袋,并将全部试剂放回2-8℃冰箱。

  3、开封后,按照建议的条件保存,校准品、包被微孔板和HRP标记抗体,有效期为14天,其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。

 

【适用仪器】

  半自动的酶标仪,如Thermo MK3,或者国产酶标仪。

 

【样本要求】

  样本类型和采集

以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中,不得使用叠氮钠做为防腐剂。

1、细胞培养上清:4000rpm条件下离心20min,去除细胞颗粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下,避免反复冻融。

2、血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,4000rpm条件下离心20min,小心地分离出血清,保存在- 20℃以下,避免反复冻融。

3、血浆:肝素,EDTA,或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下,离心20分钟取上清,血浆保存在-20℃以下,避免反复冻融。

4、蛋清:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

样本保存和稳定性

样本在2-8℃条件下,可以储存72h,或者在- 20储存6个月。样本收集后,不是一次检测完,请按一次用量分装冻存,避免反复冻融,使用时在室温下解冻,确保样品均匀充分解冻。





【检验方法】

操作程序

1. 将各种试剂移至室温平衡半小时,取浓缩洗涤液,根据当批检测数量,用蒸馏水1:20稀释,混匀后备用。

2. 将预包被板从密封袋中取出,设一个空白对照孔,不加任何液体;每个校准品依次各设两3. 孔,每孔加入相应校准品50μl;其余每个检测孔直接加质控品或待测样本50μl。

4. 每孔加入酶标抗原50μl(空白对照孔除外),再按同样的顺序每孔加入抗体50μl,充分混匀,贴上封板膜,置37℃温育1小时。

5. 手工洗板:弃去孔内液体,洗涤液注满各孔,静置10秒甩干,重复3次后拍干。洗板机洗板:选择洗涤3次程序洗板后拍干。

6. 每孔加显色剂A液50μl,显色剂B液50μl,振荡混匀后,置37℃避光显色15分钟,每孔加终止液50μl。

7.用酶标仪读数,单波长酶标仪需先用空白对照孔调零点,然后测定各孔吸光值。

 

【实验结果计算】

1、双波长酶标仪可以不设空白对照孔,也无需调零点。单波长酶标仪必须设空白对照孔,先用空白对照孔调零,然后测量。如没有调零,则各孔吸光值均需减去空白对照孔的吸光值。

2、计算百分结合率:用校准品或样品的OD值除以S0的OD值,为百分结合率。

3、手工作图:用百分结合率对数(logit-ln)坐标纸,以校准品浓度为横轴,以对应的百分结合率为纵轴,画出平滑直线,在曲线上按照待测血清百结合率找到浓度值。

4、计算机:由电脑计算出其浓度。

 

【产品性能指标】

1、外观和物理检查:液体组分应澄清,无沉淀或絮状物;所有组分应无包装破损。各组分装量不少于表1中要求。

2、准确性:在样本中添加高、中、低三个浓度的雌二醇制成样品,以试剂盒校准品进行分析测定,用百分结合率对数(logit-ln)拟合,要求回收率在85.0%~115.0%之间。

3、线性:用Logit-ln数学模型拟合,在40~1000pg/ml范围内,剂量-反应曲线相关系数(r)的绝对值应不低于0.9900。

 

4、精密度:

4.1批内精密度(CV%)应不高于15.0%;

4.2批间精密度(CV%)应不高于15.0%。

5、最低检出限:试剂盒最低检出限应不大于10 pg/ml。

6、质控血清测定值:每次检测结果均应在允许范围之内。

7、稳定性

2℃-8℃保存,有效期6个月。

8、检测范围

10pg/mL-1400pg/ml

【参考区间】

男性参考区间:11.0~159 pg/ml  

女性参考区间:15.0~249 pg/ml

受孕三月内:参考区间:80.8~3593 pg/ml,均值:368pg/ml

通过测定200份健康人血清,经统计学处理(正态分布,取95%置信区间)确定参考区间。由于人的个体差异及地域、年龄和性别的不同,所确定的参考区间存在一定差异,因此本说明书所提供的参考区间仅作参考,各实验室应根据各自地区的正常人群建立自己的参考区间。

 

【注意事项】

生物安全

1、检测必须符合实验室管理规范的规定,严格防止交叉污染,所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。

2、试剂盒的液体组分中,含有proclin-300防腐剂,可能引起皮肤过敏反应,避免吸入烟雾与皮肤接触。

3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用,避免吸入烟雾。戴上防护手套,实验完成后彻底洗手。

技术提示

1、混合蛋白溶液时,避免起泡。

2、加校准品与样本时,每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头,公共组分应该悬臂加样,避免交叉污染。

3、合适的温育时间,和充分的洗涤步骤,是保证实验结果准确性的必要条件。

4、底物溶液为无色液体,保存过程中变为蓝色,代表底物溶液已经失效,不得使用。

5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致,加入终止液后,蓝色底物产物,会瞬间变为黄色。

6、实验中,用剩的板条,应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

7、所有液体组分,使用前充分摇匀,严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。

 

 

废物处理

  所有使用或未使用的试剂,所有污染性的一次性材料,应当遵循传染性或潜在传染性产品的处理程序,每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别,进行废物和污物的处理,同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物。


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